〔摘要〕 目的：明确bmps与外周神经的关系。方法：用原位杂交方法观察bmp2，3，4，5的 mrna在三叉神经中的表达。结果：在外周神经(三叉神经)中均有bmp2，3，4，5 mrna分布，bmp2，3，4，5的分布主要位于构成神经纤维髓鞘的雪旺细胞中；此外发现bmp2在部分神经纤维中也有表达。结论：首次确定了bmp2，3，4，5在外周神经中的表达和分布，揭示了bmp2，3，4，5可能在外周神经的发育和再生以及形态结构的维持中发挥着调控作用。
骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,简称bmp)家族属于转化生长因子β(tgfβ)超家族。近年来的研究显示，bmps家族包括20种以上的成员，bmps除了在硬组织的发育和再生中发挥重要作用外，在生殖、心、肾、造血系统等的发育以及病变中也发挥着调控作用〔1～4〕。尤其引人注目的是，最新研究发现在神经系统发育的自始至终都有bmps的表达，特别是在早期的神经嵴细胞转移前后、神经管的形成及演变中、以及某些前体细胞向特定方向的成熟、细胞的程序化死亡等过程中，bmps发挥着选择性的调控作用〔5～7〕。对于bmps是否在外周神经中表达，是否在外周神经功能结构的维持中发挥作用，目前尚无文献报道。为此，本研究首先对bmps在外周神经的表达情况进行了观察和分析。
1 材料和方法
1.1 标本
选用本科室收集的三叉神经痛患者切除的三叉神经及其分支的形态和结构中仍有接近正常神经形态和结构的标本4例，标本中有纵切和横切的神经标本。均为体积分数为10%福尔马林液固定，石蜡包埋，切片厚5 μm。切片于65 ℃烤箱过夜。
1.2 探针和标记
含人源性bmp2 cdna片段(1.58 kb)的psp65-bmp2 cdna质粒和含人源性bmp3 cdna(780 bp)的pgex-2t-bmp3质粒由wozney教授惠赠(genetics institute,inc,cambridge,ma,usa)，含人源性bmp4 cdna片段(1.8 kb)的bluescript ks-bmp4由feng博士惠赠(division of endocrinology,university of texas health science center,san antonio,tx,usa),含人源性bmp5 cdna片段(246 bp)的pbmp5ut由kingsley教授惠赠(department of developmental biology,stanford university,stanford,ca,usa)。上述bmps cdna片段的标记按照dig-标记试剂盒的随机引物标记法(dig-labeling kit,boehringer mannheim biochemical)进行。
1.3 原位杂交方法步骤
上述不同bmps的原位杂交染色方法和条件相同。石蜡切片经常规脱蜡至depc水及0.1 mol/l pbs(ph 7.4)后，经0.2 mol/l hcl和蛋白酶k处理，梯度酒精脱水后室温干燥组织片。42 ℃分别加bmp2，3，4，5标记探针杂交20 h后，分别经2×scc、1×scc、buffer i、buffer ⅱ依次充分洗涤。正常羊血清封闭后，滴加抗dig-ap抗体复合物2 h(37 ℃)，经buffer i、buffer ⅲ洗涤后用显色液(为buffer ⅲ 1000 μl、左旋米唑 0.24 mg、 nbt 4.5 μl及bcip3.5 μl)暗处显色2 h，te液(10 mmol/l tris-hcl、1 mmol/l edta,ph 8.0)终止反应，部分切片用甲基绿衬染胞核，常规脱水透明封片。
实验对照为除去探针的空白对照及rnase消化对照。
2 结 果
观察的4例三叉神经痛取材的神经标本中除可观察到部分区域有退变外，仍可观察到接近正常形态结构的神经区域。原位杂交染色结果显示，bmp2，3，4，5 mram均在三叉神经中表达，bmp2，3，4，5在神经纤维髓鞘的雪旺细胞中的阳性着色情况基本相似，纵行和横向神经断面均显示了bmp2，3，4，5在神经纤维髓鞘中的阳性着色，阳性反应均匀地分布于髓鞘构成的纵行或网状结构中(图1，2，3)。此外发现bmp2在部分神经纤维中也有表达(图4)。
图1 示bmp5 mrna在神经髓鞘中的阳性表达，阳性着色构成网状结构.原位杂交，×40
图2 示bmp4 mrna在神经髓鞘中的阳性表达.原位杂交，×40本新闻共3页,当前在第1页123
责任编辑：姚红祥
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